| 聂小倩 | 郭欣妍 | 郭欣妍妩媚妖娆，演绎全新狐妖。在这部电影中，导演大胆启用新人郭欣妍担纲影片女主角。年仅20的郭欣妍自小便多才多艺、喜爱表演，而且天赋异禀，虽然身材娇小不如王祖贤版大气，但聪颖的她并没有将此当成劣势，反而凭借玲珑的身材将聂小倩这一角色的妩媚、妖娆表演得入木三分，令人刮目相看。 |
| 燕赤霞 | 邓晓旭 | 由邓晓旭饰演的燕赤霞不仅高冷帅气，而且法术高强。他性格奔放，略有些童心未泯，他视妖魔为敌，甚至偶尔还会与它们斗气。 |
| 宁采臣 | 张恒俞 | 宁采臣与聂小倩之间的爱情故事令无数观众唏嘘不已。由张恒俞饰演的宁采臣风流俊俏，痴情感人，将和郭欣妍重新演绎这个浪漫唯美的故事。在这个全新的故事中，两人虽已不再是阴阳相隔，但人妖之别始终是他们之间难以跨越的难关。 |
| 姥姥 | 高歌铃 | 由高歌铃饰演的姥姥大气冷艳，美艳惊人。她本身渴望爱情却得不到，对小倩的感情则时而慈爱、时而凶狠，身上同时兼具了魔性、妖性、人性等复杂的情感。 |
| 南小蝶 | 牛晓丽 | 牛晓丽饰演的南小蝶蝴蝶妖是影片新增角色之一。蝴蝶妖是黑山老妖手下最古灵精怪的一位，性格活泼可爱，出身于南海蝴蝶谷，所以叫南小蝶，身世非常神秘。 |
| 黑山老妖 | 六子 | 六子饰演的黑山老妖原型是一座巨大的黑山修炼成精，具有上千年的道行，无人能敌，即便是势力强大的树妖姥姥也畏惧三分，靠女鬼聂小倩拉拢黑山老妖。他虚荣、自恋，并受到万妖拥护。 |
| 蝎妖 | 唐洋洋 | 唐洋洋饰演的蝎妖也是也是影片新增的角色。蝎妖是姥姥的军师，为姥姥出谋划策， |
| 蛇妖 | 陶金春 | 陶金春饰演的蛇妖是影片新增的角色。蛇妖是姥姥的得力助手，经常幻化成美女，用各种手段引诱过路男子，最终将男子心交给姥姥练功。 |
